生物素标记辣根过氧化物酶是一种广泛应用于生物化学实验中的分子探针,特别是在免疫学和分子生物学研究中。它结合了辣根过氧化物酶的酶活性与生物素这一高亲和力的分子标记物,具有高灵敏度和可扩展性,广泛应用于酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫组织化学染色、Westernblot等实验中。

1.生物素化反应:使用生物素化试剂(如生物素-NHS酯)将生物素分子与HRP的氨基酸残基(通常是赖氨酸)发生反应,从而将生物素分子共价附着到HRP上。
2.HRP-Biotin纯化:生物素化后的HRP通过色谱技术(如亲和层析)进行纯化,以去除未反应的试剂和副产物,获得高纯度的HRP-Biotin。
3.应用机制:在应用中,HRP-Biotin常常作为检测探针。其工作原理为:HRP通过催化底物生成可检测产物(如显色反应或发光反应),而生物素分子则通过与亲和素或链霉亲和素结合,形成稳定的复合物,进一步增强信号的特异性和灵敏度。
生物素标记辣根过氧化物酶的优点:
1.高灵敏度:HRP具有高效的催化作用,可以在低浓度下提供强信号,因此生物素标记HRP非常适用于需要高灵敏度的实验。
2.特异性:生物素与亲和素的结合力强,能够提供高特异性的检测结果,减少背景噪声。
3.多功能:HRP-Biotin可以与多种检测系统结合,如显色、发光或荧光反应,具有很高的适应性。
4.广泛应用:HRP-Biotin广泛应用于多种实验,包括免疫检测、蛋白质分析、基因表达研究等。