浅谈蛋白保存

作为实验室的"打工人"，相信大家都经历过这样的崩溃时刻：好不容易纯化出来的蛋白，放冰箱几天后居然沉淀了！或者不同批次的蛋白活性忽高忽低，实验数据根本没法看...今天我们就来聊聊这个让老师们头疼的蛋白质保存问题。

一、为什么蛋白质这么"娇气"？

蛋白质就像是个精致的乐高模型，靠着氢键、盐键这些"胶水"维持着复杂的三维结构。但随便来个酸碱、高温或者剧烈震荡，这个模型就会散架。更气人的是，纯化后的蛋白比粗提物还要"作"，动不动就变性给你看。

二、保存蛋白质的五大黄金法则

1. 低温保存：但别太低

- 4℃适合短期（1周内），但记得加抗菌剂

- -20℃是常规选择，但要注意冻融损伤

- -80℃长期保存最佳，但有些蛋白反而怕冻

小贴士：像羧肽酶这种"玻璃心"蛋白，冻一次就变性；而有些酶冻融后活性反而增强，简直是"抖M"体质。

2. 分装是个技术活

- 建议50-100μl/管（土豪实验室可以任性）

- 标记一定要清楚！别问我是怎么知道的...

- 用过的蛋白放4℃不要超过一周，对于较为重要的实验探索，最好用新鲜配置或未经过反复冻融的蛋白质。

3. 浓缩才是精华

- 浓度＜1mg/ml的蛋白容易“自暴自弃"（解聚或吸附）

- 疏水蛋白特别"粘人"，喜欢抱管子不放

- 酶溶液至少要＞1%浓度

4. 速冻速融要快准狠

- 液氮速冻较理想，干冰-乙醇浴也能凑合

- 融化时37℃水浴快速搞定

- 千万别学我那个把蛋白放室温慢慢融化的师弟...

5. 添加剂的选择困难症

缓冲液：

- pH7-8的Tris或PBS最保险

- 盐浓度0-150mM为宜

保护剂全家桶：

- 甘油（10-50%）：蛋白质的"防冻液"

- DTT：对抗氧化损伤的"抗氧化剂"

- 蛋白酶抑制剂：防"自相残杀"

- 叠氮钠：有毒但有效的"防腐剂"（做动物实验的请绕道）

三、保存方法选择指南

1. 短期（＜1周）：

- 4℃+过滤除菌

- 记得定期检查

2. 长期：

- -80℃是较好的

- 冻干保存较稳定（但有些蛋白复溶困难）

四、来自老法师的忠告

1. 新纯化的蛋白先做个小样测试稳定性

2. 重要蛋白建议多种条件平行保存

3. 记录！记录！记录！（别问我为什么强调三遍）

4. 定期检查保存蛋白的活性和浓度

最后提醒：没有放之四海而皆准的保存方法，关键要了解你家蛋白的"脾气"。多查文献，多试条件，才能找到适合的保存方案。祝大家的蛋白都能"长命百岁"！

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